Trong pha tối của quang hợp có tạo ra H₂O ở giai đoạn khử 3PG thành G3P. Sử dụng nguyên tử H đánh dấu phóng xạ (H₂) để làm thí nghiệm.
Sử dụng chất khử NADPH có H được đánh dấu phóng xạ thì quá trình quang hợp sẽ tạo ra nước có nguyên tử H đánh dấu phóng xạ. → Phân tử nước đó đã được hình thành bằng cách lấy H của NADPH. Trong quang hợp, chỉ có pha tối mới sử dụng NADPH → Pha tối tạo ra nước.